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# Péptido de penetración celular
Los péptidos de penetración celular (CPPs, por sus siglas en inglés) son péptidos cortos que facilitan la admisión de varias cargas moleculares (desde nano-partículas hasta pequeñas moléculas químicas y fragmentos de ADN largos). La "carga" está asociada a los péptidos a través de uniones químicas vía enlaces covalentes o a través de interacciones no covalentes. La función de las CPPs es entregar la carga hacia el interior de las células, un proceso que comúnmente ocurre a través de la endocitosis con la carga entregada a los endosomas de las células mamíferas vivas.
Los CPPS presentan gran potencial como vectores de administración de forma in vitro como in vivo para su uso en investigación y medicina. Actualmente se están limitados debido a la falta de especificidad celular en la administración de carga mediada por CPP y la insuficiencia en el entendimiento en los modos de la admisión.
Usualmente los CPPs están compuestos por aminoácidos que contienen una carga positiva relativa abundante como la lisina o la arginina o que contengan una secuencia de patrones alternados entre aminoácidos polares y no polares, aminoácidos hidrofóbicos. A estos dos tipos de estructuras se les conoce como policatiónica o anfipática, respectivamente. Una tercera clase de CPPs son los péptidos hidrofóbicos, que contienen únicamente residuos apolares, con baja carga neta o que tienen grupos de aminoácidos hidrofóbicos que son cruciales para la admisión celular.
El primer CPP se descubrió de manera independiente por dos laboratorios en 1988, cuando se descubrió que el transactivador de la transcripción génica (TAT, por sus siglas en inglés) del virus de la inmunodeficiencia humana 1 (HIV-1) podía ser tomado de manera eficiente del medio circundante por numerosos tipos de células en cultivo.  Desde entonces, el número de CPPs se ha expandido considerablemente y se han generado pequeñas moléculas con proteínas con mayor efectividad en las propiedades transducción.

## Mecanismos para la translocación membranal
Los péptidos de penetración celular son de diferentes tamaños, secuencias de aminoácidos y cargas, pero todos los CPPs tienen una característica distintiva, la cual es la habilidad de translocar la membrana plasmática y facilitar la administración de cargas moleculares al citoplasma o a órganelos. No ha habido un consenso real acerca del mecanismo de la translocación por CPPs, pero las teorías se clasifican en tres principales mecanismos: penetración directa de la membrana, entrada mediada por endocitosis, y la translocación a través de la formación de estructuras transitorias. La transducción es un área con investigación en curso.
Los CPPs son capaces de transportar diferentes cargas moleculares a través de la membrana; en consecuencia, actúan como vehículos de administración moleculares. Los CPPs tienen numerosas aplicaciones en a medicina como agentes de administración de fármacos para el tratamiento de diferentes enfermedades, incluyendo al cáncer, inhibidores virales, así como agentes de contraste para marcar células. Ejemplos incluyen el actuar como carriers para GFP, agentes de contraste MRI o puntos cuánticos.

### Penetración directa
La mayoría de la investigación inicial sugería que la translocación de los CPPs policatiónicos a través de la membrana biológica ocurría vía un proceso celular independiente de energía. Se creía que la translocación podía llevarse a cabo a 4 °C y que lo más seguro es que involucraba una interacción electrostática directa con fosfolípidos cargados de forma negativa. Investigadores propusieron diferentes modelos en un intento de elucidar el mecanismo biofísico de este proceso independiente de energía, Aunque los CPPs promueven efectos directos en las propiedades biofísicas de sistema puro de membrana, la identificación de artefactos fijados cuando se usan CPPs de sondas marcadas fluorescentemente causó que se hiciera una reevaluación del mecanismo del importe de CPPs. Estos estudios promueven la endocitosis como la vía de translocación. Un ejemplo de la penetración directa se ha propuesto para TAT. EL primer paso en este modelo propuesto es la interacción con proteínas de fusión no dobladas (TAT) y la membrana a través de interacciones electrostáticas, que desbarata suficientemente la membrana para permitir que las proteínas de fusión crucen. Después de la internalización las proteínas de fusión se repliegan debido a un sistema de chaperón. Este mecanismo no se aceptó y otros mecanismos involucrando una endocitosis dependiente de clatrina se han sugerido.
Recientemente, un modelo detallado de la translocación directa a través de la membrana plasmática se ha propuesto. Este mecanismo involucra interacciones fuertes entre los péptidos de penetración celular y los grupos fosfato en los dos lados de la bicapa lipídica, la inserción de cadenas laterales con cargas que nuclean la formación de un poro transitorio, seguido por la translocación del péptido al difundirse por la superficie del poro. Este mecanismo explica como ingredientes clave, como la cooperatividad entre péptidos, la gran carga positiva y específicamente los grupos guanidinio, contribuyen a la admisión. El mecanismo propuesto también ilustra la importancia de las fluctuaciones membranales. En efecto los mecanismos que involucran grandes fluctuaciones en la estructura membranal como los poros de transición y la inserción de cadenas laterales de aminoácidos cargados, pueden ser comunes y posiblemente centrales en la función de muchas proteínas de membrana. Este modelo contiene muchas características con controversia, siendo el más notorio, la generación de poros de transición que facilita la difusión de péptidos a través de la membrana o el vesícula endosomal hacia el citosol. Datos experimentales recientes validan este ingrediente clave del modelo, mostrando que los CPPs generan los poros de transición en la bicapa lipídica y en células vivas.

### Translocación mediada por endocitocis
La endocitosis es el segundo mecanismo responsable de la internalización celular. La endocitosis es el proceso de la ingestión celular con la cual la membrana plasmática se pliega hacia adentro para atraer sustancias hacia la célula. Durante este proceso la célula absorbe material del exterior al introducirla a su membrana. La clasificación de la localización celular usando fluorescencia o con inhibidores de la endocitosis es la base de cualquier examen. Sin embargo, el procedimiento usado durante la preparación de estas muestras crea información cuestionable con referencia a la endocitosis. Por otra parte, estudios muestran que la entrada de penetratina por endocitosis es un proceso dependiente de energía. Este proceso es iniciado por poliargininas interactuando con sulfato de heparán que promueven la endocitosis. La investigación muestra que TAT es introducido mediante una forma de endocitosis llamada macropinocitosis.
Estudios han enseñado que la endocitosis está involucrada en la internalización de CPPs, pero se ha sugerido que diferentes mecanismos pueden ocurrir al mismo tiempo. Esto establece por el comportamiento reportado para la penetratina y transpotan ocurre la translocación de membrana y la endocitosis simultáneamente.

### Translocación mediante la formación de estructuras transitorias
El tercer mecanismo responsable de la translocación está basado en la formación de micelas invertidas. Estos son agregados de surfactantes coloides donde los grupos polares se concentran en el interior y los grupos lipofílicos se extienden afuera hacia el solvente. De acuerdo con este modelo, un dímero de penetratina se combina con fosfolípidos con carga negativa, así generando la formación de micelas invertidas dentro de la bicapa lipídica. La estructura de estas micelas permite al péptido permanecer dentro del ambiente hidrofílico. No obstante este mecanismo sigue siendo asunto de debate, debido a que la distribución de la penetrina entre el interior y exterior de la membrana es no-simétrico. Esta distribución no-simétrica produce un campo eléctrico que se ha establecido de forma correcta. Incrementando la cantidad de péptidos en los prospectos exteriores de la membrana causa que el campo eléctrico alcance un valor crítico que genera un evento parecido a la electroporación.
El último mecanismo implica que la internalización ocurre por péptidos que pertenecen a la familia de péptidos anfipáticos primarios, MPG y Pep-1. Dos modelos muy similares se han propuesto basados en estudios fisicoquímicos, que constan de un dicroísmo circular, espectroscopia infrarroja con transformada de Fourier, y una espectroscopia de resonancia magnética nuclear. Estos modelos están asociados con mediciones electrofisiológicas e investigaciones que tienen la habilidad de mimetizar modelos membranales como la monocapa en la interfase aire-agua. La estructura dando lugar a los poros es la principal diferencia entre el modelo MPG propuesto y el Pep- 1. En el modelo MPG, el poro se forma por una estructura b-barril, mientras que en el Pep-1 está asociada con hélices. También, fuertes interacciones hidrofóbicas fosfolípido-péptido se han descubierto en ambos modelos.  En los dos modelos peptídicos, los plegamientos de la molécula carrier se correlaciona con el dominio hidrofóbico, aunque el resto de la molécula permanece sin estructurar.
Los CPPs facilitando la translocación es un tema de gran debate. Evidencia ha sido presentada donde la translocación puede usar múltiples diferentes vías para la admisión. En adición, los mecanismos de translocación pueden depender si los péptidos están libres o adheridos a la carga. La admisión cuantitativa de CPP libre o conectada puede diferir en gran mediad, pero estudios no han demostrado si este cambio es el resultado de la eficiencia de la translocación o las diferentes vías en la translocación. Es probable que el resultado indica que múltiples mecanismos de CPP están en competencia y que diferentes vías contribuyen a la internalización de CPP.

## Aplicaciones de las CPPs

### Administración de ácidos nucleicos mediada por CPPs
Macromoléculas basadas e ácidos nucléicos como los siRNA, oligonucleotides antisentido, DNA señuelo, y plásmidos han sido identificados como terapéuticos biológicos y farmacológicos en la regulación de la expresión génica. Sin embargo, diferente a otros fármacos pequeños moleculares, su desarrollo y aplicaciones están limitadas por su alto peso molecular y cargas negativas, que resulta en una pequeña eficiencia de admisión y poco tráfico celular. Para vencer estos problemas, se han desarrollados múltiples diferentes mecanismos de administración, incluyendo CPP-ácido nucleico  conjugado, que es una herramienta muy poderosa.

#### Formación de complejos CCP-ácido nucleico
La mayoría de los complejos CPP-ácido nucleico  que se han propuesto hasta ahora se forman a través de enlaces covalentes. Un rango de estos complejos se han sintetizado a través de diferentes químicas que son enlaces estables o plegables. Y el método más usado en publicaciones es el de enlaces plegables disulfido a través de una síntesis fase-sólida paso a paso o fase-solución o emparejamiento fragmentado fase-sólida. Algunas otras estrategias como la amida estable, tiazolidina, oxima y la vinculación de hidrazina también se han desarrollado. Sin embargo, esos métodos de enlaces covalentes están limitados por la preocupación que el enlace sintético entre el CPP y el ácido nucleico  pueda alterar la actividad biológica de la hebra. Por ello, se ha aplicado de manera efectiva una estrategia nueva no-covalente que no requiera de modificaciones químicas con cortos CPPs anfipáticos, como los MPG y Pep-1 como carriers para la administración de carga. Estos enlaces no-covalentes conjugados se forman a través de interacciones electrostáticas o hidrofóbicas. Con este método, la carga como los ácidos nucléicos y proteínas pueden ser administradas de forma eficiente mientras se mantiene su actividad biológica completa.

#### CPPs para la administración de siRNA
RNA de interferencia corto (siRNA) es una poderosa nueva herramienta que pueden interferir y silenciar la expresión de genes específicos de enfermedades. Para mejorar la admisión de siRNA, la estrategia de CPP se ha aplicado para facilitar la administración de siRNA hacia la célula a través de enlaces covalentes o no covalentes. En un estudio, el siRNA está enlazado covalentemente al transportan y penetratina por disulfuro vinculación a extremo 5 'de las cadenas de sentido de siRNA para marcarla se usó luciferasa o eGFP mRNA reportero. En otro estudio, TAT-siRNA conjugada mediante un enlace thiomaleimide al extremo 3 'de la siRNA fue administrado a células HeLa para silenciar genes eGFP.
Sin embargo, las estrategias no covalentes parecen ser mejores para la administración de siRNA con una respuesta biológica significativamente mayor. En un estudio, complejos de MPG/siRNA formados a través de una estrategia estable no covalente mostraron la introducción exitosa de siRNA hacia células en cultivos e indujeron regulación robusta del mRNA objetivo. Adicionalmente los complejos MPG/siRNA se han usado para administrar siRNA in vivo en blastocitos de ratón para la regulación de genes. El MPG forma complejos muy estables con el siRNA con una tasa de degradación lenta y puede ser fácilmente hacerse funcionables para objetivos específicos, que es una de las mayores ventajas comparándola con las tecnologías covalentes.

#### Diseño de nuevos sustratos para la administración de siRNA
La administración celular de siRNA representa una herramienta valiosa para el tratamiento de enfermedades cancerígenas, infecciones virales y desórdenes genéticos. Sin embargo, las herramientas clásicas involucran que las moléculas en la carga estén enlazadas con enlaces covalentes a las CPPs, que no provee de una eficiente protección de las moléculas de siRNA in vivo, por ello resultados publicados en la literatura no son consistentes. Recientemente, las estrategias no covalentes se han reportado de manera exitosa. Péptidos anfipáticos secundarios basados en los residuos de triptófano aromático y arginina enlazados con lisina como un espaciador se han reportado con el nombre de CADY. CADY contiene un péptido de secuencia corta de 20 aminoácidos, con la secuencia "Ac-GLWRALWRLLRSLWRLLWRA-cisteamida." Este péptido es capaz de autoensamblarse en una forma helical con residuos hidrofóbicos e hidrofílicos en diferentes lados de la molécula, tiene dos diferentes orientaciones de la superficie que representa la menor energía y es capaz de formar complejos con el siRNA a diferentes tasas molares variando de 1:1 a 80:1. CADY es capaz de formar un escudo alrededor de la molécula de siRNA protegiéndola de procesos biodegradativos que pueden ocurrir antes de la penetración celular. Este tipo de sustancias pueden presentar importantes aplicaciones in vivo.

#### CPPs para la administración de oligómeros antisentido
Oligonucleótidos antisentido (asONs) son una gran promesa para aplicaciones antisentido en investigación básica y tratamiento clínico.Y en años recientes, las estrategias de CPPs se han desarrollado para administrar oligómeros antisentido como PNA y PMO dentro de células y han demostrado tener potencial para incrementar la biodisponibilidad, que de otra manera restringe la aplicación de los asONs. Debido a la repulsión de la membrana celular hacia las ONs cargadas negativas y la degradación por enzimas, dos tipos de ON análogas neutrales son dominantes en esta área, los ácidos peptidonucléico (PNA) y los oligómeros de morfolino fosfodiamidato (PMO o morfolino). Los PNA se han conjugado con varios CPPs a través de enlaces disulfidos o por enlaces amida estables. Un ejemplo es la actividad antisentido dentro de las células que bloqueó la expresión de los receptores de galanina en humanos cuando 21-mer PNA fue enlazada con penetratina. Resultados en actividad antiviral con PNA enfocada a HIV-1 han sido demostrados a través de enlaces disulfuros con TAT. Conjugados CPP-PMO han demostrado de manera efectiva inhibir la replicación de múltiples virus como el SARS e influenza y el adherir CPPs ha mejorado la eficacia del empalme de morfolino modificado en el desarrollo para un tratamiento para la distrofía muscular de Duchenne.

#### CPPs para la administración de ADN señuelo
El ADN señuelo (dsDNA) es una doble hebra exógena, que puede mímica una secuencia promotora que puede inhibir la actividad de un factor específico de transcripción. Pero la dsDNA tiene el mismo problema como otras terapéutica, baja biodisponibilidad. En un estudio, los CPPs TP y TP10 fueron enlazados a NFкB un ADN señuelo, que bloquea el efecto de la interleucina 1-induciendo la activación NFкB y la expresión del gen IL-6. En otro estudio, TP10 se enlazó con Myc ADN señuelo bajando la capacidad de proliferación de células N2a.

#### CPPs para la administración de plásmidos
Genes individuales pueden ser insertados en sitios específicos en plásmidos, y plásmidos recombinantes pueden ser introducidos en células vivas. Un método usandoTAT macroramificado ha sido propuesto para la administración de plásmidos de DNA en varias líneas celulares y demostró capacidades significativas de transfección. Multímeros de TAT han demostrado tener un incremento en la eficiencia de los plásmidos de DNA de 6-8 veces más que poli-L-arginina o la mutante TAT2-M1, y por 390 veces comparada con vectores estándar.

### Administración de proteínas mediada por CPP
El desarrollo de proteínas terapéuticas que ha presentado un método valioso para tratar enfermedades está limitado por la baja eficacia de los métodos tradicionales. Recientemente, múltiples métodos usando CPPs como vehículos para administrar proteínas biológicamente activa y de tamaño completo dentro de células vivas y animales se ha reportado.
Varios grupos han tenido éxito en administrar CPP fusionadas con proteínas in vitro. TAT fue capaz de administrar diferentes proteínas, como peroxidasa de rábano picante y la RNasa A a través de la membrana celular hacia el citoplasma en diferentes líneas celulares in vitro. El rango de tamaño para la administración efectiva es de 30 kDa a 120-150kDa. En otro estudio, proteínas fucionadas con TAT se internalizan rápidamente mediante una macropinocitosis dependiente de una balsa lipídica usando un ensayo TAT-recombinasa Cre reportera en células vivas. En otro estudio,TAT-proteína de fusión fue administrada a la mitocondria de células mamarias cancerígenas y disminuyendo la supervivencia de las mismas se demostró la capacidad de las TAT-proteínas de fusión para modular la función mitocondrial y la supervivencia celular. Sin embargo, muy pocos estudios in vivo han sido exitosos. En un estudio, la administración in vivo de TAT-o penetrina- reticulada con fragmentos Fab cedió la distribución variada del órgano e incrementó de manera general la retención del órgano, que demostró la localización de tejido.
Un método no covalente que forman los complejos CPP-proteínas también se han desarrollado para hacer frente a as limitaciones de los métodos covalentes, como las modificaciones químicas antes de la reticulación y la desnaturalización de proteínas antes de la administración. En un estudio, un péptido corto anfipático carrier, Pep-1, y complejos proteicos han demostrado efectividad en la administración. Se ha mostrado que Pep-1 facilita la rápida entrada celular de varios péptidos, proteínas e incluso anticuerpos de tamaño completo con alta eficiencia y menor toxicidad. Este acercamiento ha simplificado en gran medida la formulación de reactivos.

### CPP como transportadores de agentes de contraste
Hay aplicaciones de los CPPs como transportadores de agentes de contraste a través de la membrana plasmática. Estos agentes de contraste son capaces de marcar células tumorales, haciendo de los compuestos herramientas importantes para el diagnóstico de cáncer; también han sido usadas tanto en experimentos celulares in vivo como in vitro. Las clases más importantes de CPPs se aíslan de virus, como el TAT (transcripción-transactivada) derivada de VIH-1, penetrina y transportan. Los CPPs más utilizados son derivados de TAT. TAT es un CPP rico en arginina. Varios mejoraminetos incluyen el uso de aminoácidos no naturales β o γ. Esta estrategia ofrece múltiples ventajas, como la resistencia a la degradación protelítica, un proceso de degradación natural donde los enlaces del péptido se hidrolizan a aminoácidos. La inserción de aminoácidos no naturales en la cadena peptídica tiene muchas ventajas. Facilita la formación de plegómeros estables con distinta estructura secundaria. Los péptidos β mimetizan la actividad antimicrobiana de los péptidos de defensa del huésped. Esta característica requiere que la orientación en la hélice de lo catiónico-hidrofílico de un lado y del otro residuos hidrofóbicos. La adición de grupos fluorescentes en una cabeza de la molécula confiere propiedades de contraste. Una nueva estrategia para permitir la capacidad de admisión celular de CPPs está basada en la asociación de dominios policatiónicos y polianiónicos que están separados por un enlazador. La asociación celular de los residuos policatiónicos (poliarginina) con la membrana cargada de forma negativa es bloqueada efectivamente por la presencia de residuos polianiónicos (poli-ácido glutámico) y el enlace, que confiere la distancia adecuada entre estos dos residuos cargados para maximizar su interacción. Estos péptidos adoptan la estructura tallo bucle, confirmada por la correlación del efecto Overhauser para proximidades protón-protón de los dos restos cargados. En esta etapa sólo el enlace es expuesto a la hidrólisis de las proteasas en aplicaciones in vivo. La hidrólisis del enlace ocurre y los fragmentos con cargas experimentan una mayor libertado conformacioal.En la ausencia del enlace, el péptido catiónico puede interaccionar de manera eficiente con la célula objetivo y la admisión celular ocurre antes de la proteólisis. Esta estrategia tiene aplicaciones en el marcaje de células tumorales in vivo. Las células tumorales son marcadas en minutos. La degradación del enlace puede ser predicha por la cantidad de D-aminoácidos (isómero natural) incorporado en la cadena peptídica, esto restringe in vivo la proteólisis del enlace central.

#### Agentes de contraste como moléculas de carga

##### Puntos cuánticos
Los puntos cuánticos (QD, por sus siglas en inglés) representan una clase relativamente nueva de sondas fluorescentes que tienen propiedades de óptica superior que los clásicos tintes orgánicos basados en grupos fluorescentes. La principal ventaja de los QD incluyen altos rendimientos cuánticos, espectros de absorción amplio, tamaño-sintonizable de los espectros de emisión, y una buena resistencia a la degradación química y fotoquímica. Pruebas in vivo han demostrado que varios péptidos con carga positiva (basados en residuos de guanadina) son capaces de atravesar la membrana y promover la admisión celular de moléculas adheridas como los puntos cuánticos. Las propiedades de los últimos se pueden modificar de forma sencilla al cambiar el sustrato orgánico enlazado con ellos, ofreciendo una herramienta biológica con versatilidad como marcadores celulares. Investigación está en desarrollo para optimimizar las metodologías de la administración celular de los puntos cuánticos y sus bioconjugados y la caracterización de sus propiedades fotofísicas a largo plazo in vivo.

Los puntos cuánticos son nanocristales coloidales, basados en un núcleo de cadmio-selenio (CdSe) cubierto por una capa de zinc-azufre (ZnS). Este sustrato se ha usado de manera extensiva como marcadores celulares ya que el CdSe emite en el dominio visible y es un excelente agente de contraste, mientras que la capa de ZnS protege el núcleo de la oxidación y también extracción del CdSe hacia la solución circundante. Esta estrategia mejora la cesión de foto-luminiscencia. Las propiedades puede ser moduladas por el grosor de la capa protectora de ZnS. La emisión coloidal de QD se puede modular de la UV-Vis hacia la infrarroja al usar diferentes agentes de cubierta como ZnS, CdS, ZnSe, CdTe y PbSe. Las propiedades de los puntos cuánticos puede también ser modulado por un esquema sintético, alta temperatura de las mezclas de solvente/ligando que influencia en las propiedades del nanocristal. Los agentes QD de alta calidad se obtienen a altas temperaturas; sin embargo, debido a su baja solubilidad en agua su uso como marcadores celulares está limitado, Además su funcionalidad con ligandos hidrofílicos es requerida.
Las ventajas de los QD está representada por su rápida acción; son capaces de marcar un tejido objetivo o célula en segundos. En estudios in vivo se demostró que los QD son capaces de marcar de manera selectiva células de cáncer y acumularse en sitios tumorales. Las células tumorales marcadas pueden ser seguidas con un microscopio multifotón mientras invaden tejido de pulmón. En ambos estudios la imagen y substracción de auto-fluorescencia permite la visualización multicolor in vivo de las células y tejidos. Un mayor contratiempo de los QD es su relativamente alta toxicidad. La funcionalización con diferentes sustratos que incrementan la bioafinidad y disminuye la toxicidad están en progreso. Por ejemplo, el sulfuro de la capa del QD es capaz de formar enlaces disulfuro reversibles con una amplia clase de compuestos orgánicos.

#### Imagen por resonancia magnética
La imagen por resonancia magnética (IRM) es una herramienta poderosa para el diagnóstico de enfermedades como la metástasis en cáncer e inflamación, usando diferentes metales quelatos. Los metales quelatos incrementan la señal de contraste entre los tejidos normales y los enfermos al cambiar los tiempos de relajación nuclear del agua y las moléculas próximas. Los ejemplos típicos de quelatos son las moléculas de poco peso moléculas Gd3+, óxido de hierro superparamagnético (SPIO, por sus siglas en inglés). En la administración in vivo de estos agentes permite el marcar células tumorales; o células pueden ser marcadas in vitro con agentes de contraste y después ser inyectadas y monitoreadas in vivo mediante el uso de las IRM.
Las nanopartículas de SPIO confieren una alta sensibilidad a la IRM pero tienen baja afinidad por las células; trabajan a altas concentraciones. La funcionalización de estos compuestos usando guanadinas dedriméricas mostró actividades similares a las TAT basadas en CPPs pero con mayor toxicidad. Sustratos nuevos basados en dendrones con grupos periféticos hidroxil o amina presentan menor toxicidad. Las aplicaciones de SPIO incluyen el marcaje celular in vivo, debido a la baja toxicidad, están aprobados para su uso clínico en hígado, vaso e imagen gastrointestinal.
La presencia de residuos octaméricos de argenina permite la transducción de la membrana celular con varias moléculas de carga incluyendo péptidos, DNA, siRNA y agentes de contraste. Sin embargo, la habilidad de cruzar la membrana no es unidireccional; los CPPs basados en argenina son capaces de entrar y salir de la membrana, provocando una concentración general decreciente del agente de contraste y una señal resonancia magnética (RM) decreciente en un tiempo. Esto limita sus aplicaciones in vivo. Para resolver este problema, agentes de contraste con disulfuro, enlaces reversibles entre metales quelato y fracciones de transducción permiten la retención asociada a la célula. Los puentes disulfuros son reducidos por el ambiente celular y los metales quelato se mantienen atrapados en el citoplasma, incrementando el tiempo de retención en la célula objetivo.

title: Péptido de penetración celular

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Los '''péptidos de penetración celular''' (CPPs, por sus siglas en inglés) son [[péptido]]s cortos que facilitan la admisión de varias cargas moleculares (desde nano-partículas hasta pequeñas moléculas químicas y fragmentos de ADN largos). La "carga" está asociada a los péptidos a través de uniones químicas vía [[enlace covalente|enlaces covalentes]] o a través de [[interacciones no covalentes]].<ref>{{Cita publicación |url=https://www.nature.com/articles/s41598-021-87134-w|título=Predicting cell-penetrating peptides using machine learning algorithms and navigating in their chemical space|apellidos=de Oliveira|nombre=Ewerton Cristhian Lima|apellidos2=Santana|nombre2=Kauê|fecha=2021-04-07|publicación=Scientific Reports|volumen=11|número=1|páginas=7628|fechaacceso=2021-04-15|idioma=en|issn=2045-2322|doi=10.1038/s41598-021-87134-w|pmc=8027643|pmid=33828175|apellidos3=Josino|nombre3=Luiz|apellidos4=Lima e Lima|nombre4=Anderson Henrique|apellidos5=de Souza de Sales Júnior|nombre5=Claudomiro}}</ref><ref>{{Cita publicación|url=https://doi.org/10.1021/nn4057269|título=Cell-Penetrating Peptides: Design, Synthesis, and Applications|apellidos=Copolovici|nombre=Dana Maria|apellidos2=Langel|nombre2=Kent|fecha=2014-03-25|publicación=ACS Nano|volumen=8|número=3|páginas=1972–1994|fechaacceso=2021-04-15|issn=1936-0851|doi=10.1021/nn4057269|apellidos3=Eriste|nombre3=Elo|apellidos4=Langel|nombre4=Ülo}}</ref> La función de las CPPs es entregar la carga hacia el interior de las células, un proceso que comúnmente ocurre a través de la [[endocitosis]] con la carga entregada a los [[endosoma]]s de las células mamíferas vivas.

Los CPPS presentan gran potencial como vectores de administración de forma ''in vitro'' como ''in vivo'' para su uso en investigación y medicina. Actualmente se están limitados debido a la falta de especificidad celular en la administración de carga mediada por CPP y la insuficiencia en el entendimiento en los modos de la admisión.

Usualmente los CPPs están compuestos por [[aminoácidos]] que contienen una carga positiva relativa abundante como la [[lisina]] o la [[arginina]] o que contengan una secuencia de patrones alternados entre aminoácidos [[polaridad (química)|polares]] y no polares, aminoácidos [[hidrófobo|hidrofóbicos]]. A estos dos tipos de estructuras se les conoce como policatiónica o [[anfipática]], respectivamente. Una tercera clase de CPPs son los péptidos hidrofóbicos, que contienen únicamente residuos apolares, con baja carga neta o que tienen grupos de aminoácidos hidrofóbicos que son cruciales para la admisión celular.<ref>Milletti F (2012) Cell-penetrating peptides: classes, origin, and current landscape. Drug Discov Today 17: 850–860.</ref><ref>Stalmans, Sofie; Wynendaele, Evelien; Bracke, Nathalie; Gevaert, Bert; D'Hondt, Matthias; Peremans, Kathelijne; Burvenich, Christian; De Spiegeleer, Bart. Chemical-Functional Diversity in Cell-Penetrating Peptides.PLOS ONE Volume: 8 Issue: 8 Article Number: e71752</ref>

El primer CPP se descubrió de manera independiente por dos laboratorios en 1988, cuando se descubrió que el [[tat|transactivador de la transcripción génica]] (TAT, por sus siglas en inglés) del [[virus de la inmunodeficiencia humana]] 1 (HIV-1) podía ser tomado de manera eficiente del medio circundante por numerosos tipos de células en cultivo.<ref>Protein Transduction: Cell Penetrating Peptides and Their Therapeutic Applications; Wagstaff, Kylie M.; Jans, David A; Current Medicinal Chemistry, Volume 13, Number 12, May 2006 , pp. 1371-1387(17)</ref>  Desde entonces, el número de CPPs se ha expandido considerablemente y se han generado pequeñas moléculas con proteínas con mayor efectividad en las propiedades [[transducción de señal|transducción]].<ref>Okuyama, M. and Laman, H. and Kingsbury, S.R. and Visintin, C. and Leo, E. and Eward, K.L. and Stoeber, K. and Boshoff, C. and Williams, G.H. and Selwood, D.L. (2007) Small-molecule mimics of an α-helix for efficient transport of proteins into cells. Nature Methods, 4 (2). pp. 153-159</ref>

== Mecanismos para la translocación membranal ==

Los péptidos de penetración celular son de diferentes tamaños, secuencias de aminoácidos y cargas, pero todos los CPPs tienen una característica distintiva, la cual es la habilidad de translocar la [[membrana plasmática]] y facilitar la administración de cargas moleculares al citoplasma o a órganelos. No ha habido un consenso real acerca del mecanismo de la translocación por CPPs, pero las teorías se clasifican en tres principales mecanismos: penetración directa de la membrana, entrada mediada por endocitosis, y la translocación a través de la formación de estructuras transitorias. La transducción es un área con investigación en curso.<ref>. Opalinska, J. B.; Gewirtz, A. M. Nucleic-acid therapeutics: basic principles and recent applications.  Nat. Rev. Drug Discov. 2002, 1, 503-514</ref><ref>Eckstein, F. The versatility of oligonucleotides as potential therapeutics. Expert. Opin. Biol. Ther. 2007, 7, 1021-1034.</ref>

Los CPPs son capaces de transportar diferentes cargas moleculares a través de la membrana; en consecuencia, actúan como vehículos de administración moleculares. Los CPPs tienen numerosas aplicaciones en a medicina como agentes de administración de fármacos para el tratamiento de diferentes enfermedades, incluyendo al cáncer, inhibidores virales, así como agentes de contraste para marcar células. Ejemplos incluyen el actuar como ''carriers'' para [[Proteína verde fluorescente|GFP]], agentes de contraste MRI o [[punto cuántico|puntos cuánticos]].<ref>Stewart, K., M., Hortonb, K., L., O. Kelley S., O., Org. Biomol. Chem., 2008, 6, 2242–2255</ref>

=== Penetración directa ===
La mayoría de la investigación inicial sugería que la translocación de los CPPs policatiónicos a través de la membrana biológica ocurría vía un proceso celular independiente de energía. Se creía que la translocación podía llevarse a cabo a 4 °C y que lo más seguro es que involucraba una interacción [[electrostática]] directa con [[Fosfolípido|fosfolípidos]] cargados de forma negativa. Investigadores propusieron diferentes modelos en un intento de elucidar el mecanismo biofísico de este proceso independiente de energía, Aunque los CPPs promueven efectos directos en las propiedades biofísicas de sistema puro de membrana, la identificación de artefactos fijados cuando se usan CPPs de sondas marcadas fluorescentemente causó que se hiciera una reevaluación del mecanismo del importe de CPPs.<ref>Luo, D.; Saltzman, W. M. Synthetic DNA delivery systems. Nat. Biotechnol. 2000, 18, 33-37.</ref> Estos estudios promueven la endocitosis como la vía de translocación. Un ejemplo de la penetración directa se ha propuesto para TAT. EL primer paso en este modelo propuesto es la interacción con proteínas de fusión no dobladas (TAT) y la membrana a través de interacciones electrostáticas, que desbarata suficientemente la membrana para permitir que las proteínas de fusión crucen. Después de la internalización las proteínas de fusión se repliegan debido a un sistema de chaperón. Este mecanismo no se aceptó y otros mecanismos involucrando una endocitosis dependiente de clatrina se han sugerido.<ref>Vives, E., Brodin, P. and Lebleu, B. (1997) J. Biol. Chem. 272, 16010–16017</ref><ref>Zelphati O. and Szoka F. C. Jr (1996) Intracellular distribution and mechanism of delivery of oligonucleotides mediated by cationic lipids. Pharm. Res. 13: 1367–1372</ref>
[[Archivo:Direct penetrating example.png|thumb|Ejemplo de la translocación de carga a través de penetración directa.|400px]]

Recientemente, un modelo detallado de la translocación directa a través de la membrana plasmática se ha propuesto.<ref>[http://www.pnas.org/content/104/52/20805.full.pdf+html	Download H. D. Herce & A. E. Garcia (2007) PNAS, 104, 20805]</ref><ref>H. D. Herce & A. E. Garcia (2008) Journal of Biological Physics, 33, 345</ref> Este mecanismo involucra interacciones fuertes entre los péptidos de penetración celular y los grupos fosfato en los dos lados de la [[bicapa lipídica]], la inserción de cadenas laterales con cargas que nuclean la formación de un poro transitorio, seguido por la translocación del péptido al difundirse por la superficie del poro. Este mecanismo explica como ingredientes clave, como la cooperatividad entre péptidos, la gran carga positiva y específicamente los grupos guanidinio, contribuyen a la admisión. El mecanismo propuesto también ilustra la importancia de las fluctuaciones membranales. En efecto los mecanismos que involucran grandes fluctuaciones en la estructura membranal como los poros de transición y la inserción de cadenas laterales de aminoácidos cargados, pueden ser comunes y posiblemente centrales en la función de muchas proteínas de membrana. Este modelo contiene muchas características con controversia, siendo el más notorio, la generación de poros de transición que facilita la difusión de péptidos a través de la membrana o el vesícula endosomal hacia el [[citosol]]. Datos experimentales recientes validan este ingrediente clave del modelo, mostrando que los CPPs generan los poros de transición en la bicapa lipídica y en células vivas.<ref>H. D. Herce et al (2009) Biophysical Journal, 97, 1917-1925 [http://arxiv.org/abs/0910.1736 	arXiv:0910.1736v1]</ref>

=== Translocación mediada por endocitocis ===
[[File:Endocytosis.png|thumb|Endocitosis mediada por péptidos de penetración celular
|400px]]

La [[endocitosis]] es el segundo mecanismo responsable de la internalización celular. La endocitosis es el proceso de la [[ingestión]] celular con la cual la membrana plasmática se pliega hacia adentro para atraer sustancias hacia la célula. Durante este proceso la célula absorbe material del exterior al introducirla a su membrana. La clasificación de la localización celular usando fluorescencia o con inhibidores de la endocitosis es la base de cualquier examen. Sin embargo, el procedimiento usado durante la preparación de estas muestras crea información cuestionable con referencia a la endocitosis. Por otra parte, estudios muestran que la entrada de penetratina por endocitosis es un proceso dependiente de energía. Este proceso es iniciado por poliargininas interactuando con sulfato de heparán que promueven la endocitosis. La investigación muestra que TAT es introducido mediante una forma de endocitosis llamada macropinocitosis.<ref>Frankel, A. D.; Pabo, C. O. Cellular uptake of the tat protein from human immunodeficiency
virus. Cell 1988, 55, 1189-1193</ref><ref>Lundberg M. and Johansson M. (2001) Is VP22 nuclear homing an artifact? Nat. Biotechnol. 19: 713–714</ref>

Estudios han enseñado que la endocitosis está involucrada en la internalización de CPPs, pero se ha sugerido que diferentes mecanismos pueden ocurrir al mismo tiempo. Esto establece por el comportamiento reportado para la penetratina y transpotan ocurre la translocación de membrana y la endocitosis simultáneamente.<ref>Lundberg M., Wikstrom S. and Johansson M. (2003) Cell surface adherence and endocytosis of protein transduction domains. Mol. Ther. 8: 143–150</ref><ref>J. Howl, I.D. Nicholl, Biochem. Soc. Trans (2007) 35, 767-769</ref>

=== Translocación mediante la formación de estructuras transitorias ===

[[Archivo:Inverted micelle1.png|thumb|Translocación mediada por la formación de micelas invertidas|400px]]
El tercer mecanismo responsable de la translocación está basado en la formación de [[micela]]s invertidas. Estos son agregados de surfactantes coloides donde los grupos polares se concentran en el interior y los grupos lipofílicos se extienden afuera hacia el solvente. De acuerdo con este modelo, un dímero de penetratina se combina con fosfolípidos con carga negativa, así generando la formación de micelas invertidas dentro de la bicapa lipídica. La estructura de estas micelas permite al péptido permanecer dentro del ambiente hidrofílico.<ref>Plenat T., Deshayes S., Boichot S., Milhiet P. E., Cole R., Heitz F. et al. (2004) Interaction of primary amphipathic cellpenetrating peptides with phospholipid-supported monolayers. Langmuir 20: 9255–9261</ref><ref>Deshayes S., Gerbal-Chaloin S., Morris M. C., Aldrian-Herrada G., Charnet P., Divita G. et al. (2004) On the mechanism of non-endosomial peptide-mediated cellular delivery of nucleic acids. Biochim. Biophys. Acta 1667: 141–147</ref><ref>Deshayes S., Heitz A., Morris M. C., Charnet P., Divita G. and Heitz F. (2004) Biochemistry 43: 1449–1457</ref> No obstante este mecanismo sigue siendo asunto de debate, debido a que la distribución de la penetrina entre el interior y exterior de la membrana es no-simétrico. Esta distribución no-simétrica produce un [[campo eléctrico]] que se ha establecido de forma correcta. Incrementando la cantidad de péptidos en los prospectos exteriores de la membrana causa que el campo eléctrico alcance un valor crítico que genera un evento parecido a la [[electroporación]].

El último mecanismo implica que la internalización ocurre por péptidos que pertenecen a la familia de péptidos anfipáticos primarios, MPG y Pep-1. Dos modelos muy similares se han propuesto basados en estudios fisicoquímicos, que constan de un dicroísmo circular, espectroscopia infrarroja con [[transformada de Fourier]], y una espectroscopia de resonancia magnética nuclear. Estos modelos están asociados con mediciones electrofisiológicas e investigaciones que tienen la habilidad de mimetizar modelos membranales como la monocapa en la interfase aire-agua. La estructura dando lugar a los poros es la principal diferencia entre el modelo MPG propuesto y el Pep- 1. En el modelo MPG, el poro se forma por una estructura b-barril, mientras que en el Pep-1 está asociada con hélices. También, fuertes interacciones hidrofóbicas fosfolípido-péptido se han descubierto en ambos modelos.<ref>Magzoub M., Kilk K., Eriksson L. E., Langel U. and Graslund A. (2001) Interaction and structure induction of cell-penetrating peptides in the presence of phospholipid vesicles. Biochim. Biophys. Acta 1512: 77–89</ref><ref>Deshayes S., Plenat, T., Aldran-Herrada, G., Divita G., Le Grimellec C. and Heitz F. (2004) Primary amphipathic cell penetrating peptides: structural requirements and interactions with model membranes. Biochemistry 43: 7698–7706</ref>  En los dos modelos peptídicos, los plegamientos de la molécula ''carrier'' se correlaciona con el dominio hidrofóbico, aunque el resto de la molécula permanece sin estructurar.<ref>Derossi D., Calvet S., Trembleau A., Brunissen A., Chassaing G. and Prochiantz A. (1996) Cell internalization of the third helix of the Antennapedia homeodomain is receptor independent. J. Biol. Chem. 271: 18188–18193</ref>
[[Archivo:Barrel.png|thumb|Translocación mediada por una estructura trancitoria|400px]]Los CPPs facilitando la translocación es un tema de gran debate. Evidencia ha sido presentada donde la translocación puede usar múltiples diferentes vías para la admisión. En adición, los mecanismos de translocación pueden depender si los péptidos están libres o adheridos a la carga. La admisión cuantitativa de CPP libre o conectada puede diferir en gran mediad, pero estudios no han demostrado si este cambio es el resultado de la eficiencia de la translocación o las diferentes vías en la translocación. Es probable que el resultado indica que múltiples mecanismos de CPP están en competencia y que diferentes vías contribuyen a la internalización de CPP.<ref>Tilstra, J., Rehman, K.K., Hennon, T., Plevy, S.E., Clemens, P. and Robbins, P.D. (2007) Biochem. Soc. Trans. 35, 811–815</ref>

== Aplicaciones de las CPPs ==

=== Administración de ácidos nucleicos mediada por CPPs ===
Macromoléculas basadas e ácidos nucléicos como los siRNA, oligonucleotides antisentido, DNA señuelo, y plásmidos han sido identificados como terapéuticos biológicos y farmacológicos en la regulación de la expresión génica.<ref>M.C. Morris, S. Deshayes, F. Simeoni, G. Aldrian-Herrada, F. Heitz, G. Divita, A noncovalent peptide-based strategy for peptide and short interfering RNA delivery, in: Ü. Langel (Ed.), Cell-penetrating peptides, 2007, pp. 387–408.</ref><ref>S. El-Andaloussi, T. Holm, Ü. Langel, Cell-penetrating peptides: mechanism and applications, Curr. Pharma. Design 11 (2005) 3597–3611.</ref><ref>J. Gariepy, K. Kawamura, Vectorial delivery of macromolecules into cells using peptide-based vehicles, Trends Biotechnol. 19 (2000) 21–28.</ref> Sin embargo, diferente a otros fármacos pequeños moleculares, su desarrollo y aplicaciones están limitadas por su alto peso molecular y cargas negativas, que resulta en una pequeña eficiencia de admisión y poco tráfico celular. Para vencer estos problemas, se han desarrollados múltiples diferentes mecanismos de administración, incluyendo CPP-ácido nucleico  conjugado, que es una herramienta muy poderosa.

==== Formación de complejos CCP-ácido nucleico  ====
[[Archivo:Conjugation of CPPs and cargoes.jpg|thumb|Enlace covlente entre CPP y ácido nucleico |400px]]La mayoría de los complejos CPP-ácido nucleico  que se han propuesto hasta ahora se forman a través de enlaces covalentes. Un rango de estos complejos se han sintetizado a través de diferentes químicas que son enlaces estables o plegables. Y el método más usado en publicaciones es el de enlaces plegables disulfido a través de una síntesis fase-sólida paso a paso o fase-solución o emparejamiento fragmentado fase-sólida.<ref>John J. Turner, Andrey A. Arzumanov, Gabriela Ivanova, Martin Fabani, and Michael J. Gait; Peptide Conjugates of Oligonucleotide Analogs and siRNA for Gene Expression Modulation;in: Ü Langel. Handbook of Cell-Penetrating Peptides, Second Edition, 2007</ref> Algunas otras estrategias como la amida estable, tiazolidina, oxima y la vinculación de hidrazina también se han desarrollado.<ref>Stetsenko, D.A. and Gait, M.J., Efficient conjugation of peptides to oligonucleotides by ‘native ligation’, J. Org. Chem., 65, 4900, 2000.</ref> Sin embargo, esos métodos de enlaces covalentes están limitados por la preocupación que el enlace sintético entre el CPP y el ácido nucleico  pueda alterar la actividad biológica de la hebra.<ref>B.R. Meade, S.F. Dowdy, Exogenous siRNA delivery using peptide transduction domains/cell penetrating peptides, Adv. Drug Deliv. Rev. 59 (2007) 134–140.</ref> Por ello, se ha aplicado de manera efectiva una estrategia nueva no-covalente que no requiera de modificaciones químicas con cortos CPPs anfipáticos, como los MPG y Pep-1 como ''carriers'' para la administración de carga.<ref>M.C. Morris, P. Vidal, L. Chaloin, F. Heitz, G. Divita, A new peptide vector for efficient delivery of oligonucleotides into mammalian cells, Nucleic Acids Res. 25 (1997) 2730–2736.</ref><ref name="F. Simeoni, M.C. Morris 2003">F. Simeoni, M.C. Morris, F. Heitz, G. Divita, Insight into the mechanism of the peptide-based gene delivery system MPG: implications for delivery of siRNA into mammalian cells, Nucleic Acids Res. 31 (2003) 2717–2724.</ref> Estos enlaces no-covalentes conjugados se forman a través de interacciones electrostáticas o hidrofóbicas. Con este método, la carga como los ácidos nucléicos y proteínas pueden ser administradas de forma eficiente mientras se mantiene su actividad biológica completa.[[Archivo:Covalent linkage between CPP and nucleic aicd.jpg|thumb|Enlace covlente entre CPP y ácido nucleico |400px]]

==== CPPs para la administración de siRNA ====
RNA de interferencia corto (siRNA) es una poderosa nueva herramienta que pueden interferir y silenciar la expresión de genes específicos de enfermedades.<ref>A. De Fougerolles, H.-P. Vornlocher, J. Maraganore, J. Lieberman, Interfering with disease: a progress report on siRNA-based therapeutics, Nat. Rev. Drug Disc. 6 (2007) 443–453</ref> Para mejorar la admisión de siRNA, la estrategia de CPP se ha aplicado para facilitar la administración de siRNA hacia la célula a través de enlaces covalentes o no covalentes. En un estudio, el siRNA está enlazado covalentemente al transportan y penetratina por disulfuro vinculación a extremo 5 'de las cadenas de sentido de siRNA para marcarla se usó [[luciferasa]] o eGFP mRNA reportero.<ref>Muratovska, A. and Eccles, M.R., Conjugate for efficient delivery of short interfering RNA (siRNA) into mammalian cells, FEBS Lett., 558, 63, 2004.</ref> En otro estudio, TAT-siRNA conjugada mediante un enlace thiomaleimide al extremo 3 'de la siRNA fue administrado a células HeLa para silenciar genes eGFP.<ref>Chiu, Y.-L. et al., Visualizing a correlation between siRNA, localization, cellular uptake and RNAi in living cells, Chem. Biol., 11, 1165, 2004.</ref>

Sin embargo, las estrategias no covalentes parecen ser mejores para la administración de siRNA con una respuesta biológica significativamente mayor. En un estudio, complejos de MPG/siRNA formados a través de una estrategia estable no covalente mostraron la introducción exitosa de siRNA hacia células en cultivos e indujeron regulación robusta del mRNA objetivo.<ref name="F. Simeoni, M.C. Morris 2003" /> Adicionalmente los complejos MPG/siRNA se han usado para administrar siRNA ''in vivo'' en blastocitos de ratón para la regulación de genes.<ref>D. Zeineddine, E. Papadimou, K. Chebli, M. Gineste, J. Liu, C. Grey, S. Thurig, A. Behfar, V.A. Wallace, I.S. Skerjanc, M. Puceat, Oct-3/4 dose dependently regulates specification of embryonic stem cells toward a cardiac lineage and early heart development, Dev. Cell. 11 (2006) 535–546</ref> El MPG forma complejos muy estables con el siRNA con una tasa de degradación lenta y puede ser fácilmente hacerse funcionables para objetivos específicos, que es una de las mayores ventajas comparándola con las tecnologías covalentes.

==== Diseño de nuevos sustratos para la administración de siRNA ====
La administración celular de siRNA representa una herramienta valiosa para el tratamiento de enfermedades cancerígenas, infecciones virales y desórdenes genéticos. Sin embargo, las herramientas clásicas involucran que las moléculas en la carga estén enlazadas con enlaces covalentes a las CPPs, que no provee de una eficiente protección de las moléculas de siRNA ''in vivo'', por ello resultados publicados en la literatura no son consistentes. Recientemente, las estrategias no covalentes se han reportado de manera exitosa. Péptidos anfipáticos secundarios basados en los residuos de triptófano aromático y arginina enlazados con lisina como un espaciador se han reportado con el nombre de CADY. CADY contiene un péptido de secuencia corta de 20 aminoácidos, con la secuencia "Ac-GLWRALWRLLRSLWRLLWRA-cisteamida."<ref>Crombez., L, Gudrun A.-H. , Konate, K.,, Nguyen, Q., N., McMaster, G., K. Brasseur, R., Heitz, F., Divita, G., Molecular Therapy, 2009(17), 95-107.</ref> Este péptido es capaz de autoensamblarse en una forma helical con residuos hidrofóbicos e hidrofílicos en diferentes lados de la molécula, tiene dos diferentes orientaciones de la superficie que representa la menor energía y es capaz de formar complejos con el siRNA a diferentes tasas molares variando de 1:1 a 80:1. CADY es capaz de formar un escudo alrededor de la molécula de siRNA protegiéndola de procesos biodegradativos que pueden ocurrir antes de la penetración celular. Este tipo de sustancias pueden presentar importantes aplicaciones ''in vivo''.

==== CPPs para la administración de oligómeros antisentido ====
Oligonucleótidos antisentido (asONs) son una gran promesa para aplicaciones antisentido en investigación básica y tratamiento clínico.Y en años recientes, las estrategias de CPPs se han desarrollado para administrar oligómeros antisentido como PNA y PMO dentro de células y han demostrado tener potencial para incrementar la biodisponibilidad, que de otra manera restringe la aplicación de los asONs. Debido a la repulsión de la membrana celular hacia las ONs cargadas negativas y la degradación por enzimas, dos tipos de ON análogas neutrales son dominantes en esta área, los [[Ácido peptidonucleico|ácidos peptidonucléico]] (PNA) y los oligómeros de morfolino fosfodiamidato (PMO o morfolino). Los PNA se han conjugado con varios CPPs a través de enlaces disulfidos o por enlaces amida estables.<ref>Zatsepin, T.S. et al., Conjugates of oligonucleotides and analogues with cell penetrating peptides as gene silencing agents, Curr. Pharm. Des., 11, 3639, 2005.</ref> Un ejemplo es la actividad antisentido dentro de las células que bloqueó la expresión de los receptores de galanina en humanos cuando 21-mer PNA fue enlazada con penetratina.<ref>Pooga, M. et al., Cell penetrating PNA constructs regulate galanin receptor levels and modify pain transmission ''in vivo'', Nat. Biotechnol., 16, 857, 1998.</ref> Resultados en actividad antiviral con PNA enfocada a HIV-1 han sido demostrados a través de enlaces disulfuros con TAT.<ref>Tripathi, S., Chaubey, B., Barton, B.E. and Pandey, V.N. (2007) Virology 363, 91–103</ref> Conjugados CPP-PMO han demostrado de manera efectiva inhibir la replicación de múltiples virus como el SARS<ref>B.W. Neuman, D.A. Stein, A.D. Kroeker, M.R. Hong, K. Bestwick, P.L. Iversen, M.J. Buchmeier, Inhibition and escape of SARS-CoV treated with antisense morpholino oligomers, Adv. Exp. Med. Biol. 581 (2006) 567–571.</ref> e influenza<ref>Q. Ge, M. Pastey, D. Kobasa, P. Puthavathana, C. Lupfer, R.K. Bestwick, P.L. Iversen, J. Chen, D.A. Stein, Inhibition of multiple subtypes of influenza Avirus in cell cultures with morpholino oligomers, Antimicrob. Agents Chemother. 50 (2006) 3724–3733.</ref> y el adherir CPPs ha mejorado la eficacia del empalme de morfolino modificado en el desarrollo para un tratamiento para la [[Distrofia muscular de Duchenne|distrofía muscular de Duchenne]].<ref>B. Wu, H.M. Moulton, P.L. Iversen, J. Jiang, J. Li, J. Li, C.F. Spurney, A. Sali, A.D. Guerron, K. Nagaraju, T. Doran, P. Lu, X. Xiao, Q.L. Lu, Effective rescue of dystrophin improves cardiac function in dystrophin-deficient mice by a modified morpholino oligomer, Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (2008) 14814-14819.</ref>

==== CPPs para la administración de ADN señuelo ====
El ADN señuelo (dsDNA) es una doble hebra exógena, que puede mímica una secuencia promotora que puede inhibir la actividad de un factor específico de transcripción.<ref>Morishita, R., Gibbons, G.H., Horiuchi, M., Ellison, K.E., Nakama, M., Zhang, L., Kaneda, Y., Ogihara, T. and Dzau, V.J. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 5855–5859</ref> Pero la dsDNA tiene el mismo problema como otras terapéutica, baja biodisponibilidad. En un estudio, los CPPs TP y TP10 fueron enlazados a NFкB un ADN señuelo, que bloquea el efecto de la [[Interleucina-1|interleucina 1]]-induciendo la activación NFкB y la expresión del gen IL-6.<ref>Fisher L, Soomets U, Cortes Toro V, Chilton L, Jiang Y, Langel Ü , Iverfeldt K: Cellular delivery of a double-stranded oligonucleotide NFkappaB decoy by hybridization to complementary PNA linked to a cell-penetrating peptide. Gene Ther 2004, 11:1264-1272.</ref> En otro estudio, TP10 se enlazó con Myc ADN señuelo bajando la capacidad de proliferación de células N2a.<ref>El-Andaloussi S, Johansson H, Magnusdottir A, Jä rver P, Lundberg P, Langel Ü : TP10, a delivery vector for decoy oligonucleotides targeting the Myc protein. J Control Release 2005, 110:189-201.</ref>

==== CPPs para la administración de plásmidos ====
Genes individuales pueden ser insertados en sitios específicos en plásmidos, y plásmidos recombinantes pueden ser introducidos en células vivas. Un método usandoTAT macroramificado ha sido propuesto para la administración de plásmidos de DNA en varias líneas celulares y demostró capacidades significativas de transfección.<ref>Liu, Z., Li, M., Cui, D. and Fei, J. (2005) J. Controlled Release 102, 699–710</ref> Multímeros de TAT han demostrado tener un incremento en la eficiencia de los plásmidos de DNA de 6-8 veces más que poli-L-arginina o la mutante TAT2-M1, y por 390 veces comparada con vectores estándar.<ref>C. Rudolph et al., Oligomers of the arginine-rich motif of the HIV-1 TAT protein are capable of transferring plasmid DNA into cells. J. Biol. Chem. 278 (2003), pp. 11411–11418</ref>

=== Administración de proteínas mediada por CPP ===
El desarrollo de proteínas terapéuticas que ha presentado un método valioso para tratar enfermedades está limitado por la baja eficacia de los métodos tradicionales. Recientemente, múltiples métodos usando CPPs como vehículos para administrar proteínas biológicamente activa y de tamaño completo dentro de células vivas y animales se ha reportado.

Varios grupos han tenido éxito en administrar CPP fusionadas con proteínas ''in vitro''. TAT fue capaz de administrar diferentes proteínas, como peroxidasa de rábano picante y la RNasa A a través de la membrana celular hacia el citoplasma en diferentes líneas celulares ''in vitro''. El rango de tamaño para la administración efectiva es de 30 kDa a 120-150kDa. En otro estudio, proteínas fucionadas con TAT se internalizan rápidamente mediante una macropinocitosis dependiente de una [[Balsas lipídicas|balsa lipídica]] usando un ensayo TAT-recombinasa Cre reportera en células vivas.<ref>Wadia JS, Stan RV, Dowdy SF: Transducible TAT-HA fusogenic peptide enhances escape of TAT-fusion proteins after lipid raft macropinocytosis. Nat Med 2004, 10:310-315.</ref> En otro estudio,TAT-proteína de fusión fue administrada a la mitocondria de células mamarias cancerígenas y disminuyendo la supervivencia de las mismas se demostró la capacidad de las TAT-proteínas de fusión para modular la función mitocondrial y la supervivencia celular. Sin embargo, muy pocos estudios in vivo han sido exitosos. En un estudio, la administración in vivo de TAT-o penetrina- reticulada con fragmentos Fab cedió la distribución variada del órgano e incrementó de manera general la retención del órgano, que demostró la localización de tejido.<ref>S. Kameyama, M. Horie, T. Kikuchi, T. Omura, T. Takeuchi, I. Nakase, Y. Sugiura and S. Futaki, Bioconjugate Chem., 2006, 17, 597–602.</ref>

Un método no covalente que forman los complejos CPP-proteínas también se han desarrollado para hacer frente a as limitaciones de los métodos covalentes, como las modificaciones químicas antes de la reticulación y la desnaturalización de proteínas antes de la administración. En un estudio, un péptido corto anfipático ''carrier,'' Pep-1'','' y complejos proteicos han demostrado efectividad en la administración. Se ha mostrado que Pep-1 facilita la rápida entrada celular de varios péptidos, proteínas e incluso anticuerpos de tamaño completo con alta eficiencia y menor toxicidad. Este acercamiento ha simplificado en gran medida la formulación de reactivos.<ref>M. C. Morris, J. Depollier, J. Mery, F. Heitz and G. Divita, Nat. Biotechnol., 2001, 19, 1173–1176.</ref>

=== CPP como transportadores de agentes de contraste ===

Hay aplicaciones de los CPPs como transportadores de agentes de contraste a través de la membrana plasmática. Estos agentes de contraste son capaces de marcar células tumorales, haciendo de los compuestos herramientas importantes para el diagnóstico de cáncer; también han sido usadas tanto en experimentos celulares ''in vivo'' como ''in vitro.'' Las clases más importantes de CPPs se aíslan de virus, como el TAT (transcripción-transactivada) derivada de VIH-1, penetrina y transportan. Los CPPs más utilizados son derivados de TAT. TAT es un CPP rico en arginina. Varios mejoraminetos incluyen el uso de aminoácidos no naturales β o γ. Esta estrategia ofrece múltiples ventajas, como la resistencia a la degradación protelítica, un proceso de degradación natural donde los enlaces del péptido se hidrolizan a aminoácidos. La inserción de aminoácidos no naturales en la cadena peptídica tiene muchas ventajas. Facilita la formación de [[plegómeros]] estables con distinta estructura secundaria.<ref>Cheng, R. P., S. H. Gellman, and W. F. DeGrado. 2001. Peptides: from structure to function. Chem. Rev. 101:3219–3232.</ref><ref>Seebach, D., S. Abele, J. V. Schreiber, B. Martinoni, A. K. Nussbaum, H. Schild, H. Schulz, H. Hennecke, R. Woessner, and F. Bitsch. 1998. Biological and pharmacokinetic studies with β-peptides. Chimica 1998(52)734–739.</ref><ref>Akkarawongsa, R., Terra B. Potocky, T., B., English, E., B., Gellman, S., H., and Brandt, C., R., ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, 2008, 2120–2129.</ref> Los péptidos β mimetizan la actividad antimicrobiana de los péptidos de defensa del huésped.<ref>Liu, D., and W. F. DeGrado. J. Am. Chem. Soc. 2001(123),7553–7559.</ref><ref>Porter, E. A., X. Wang, H. S. Lee, B. Weisblum, and S. H. Gellman, Nature, 2000, 404-565.</ref><ref>Porter, E. A., B. Weisblum, and S. H. Gellman. J. Am. Chem. Soc. 2002(124), 7324–7330.</ref><ref>Raguse, T. L., E. A. Porter, B. Weisblum, and S. H. Gellman. J. Am. Chem. Soc. 2002(124),. 12774–12785.</ref> Esta característica requiere que la orientación en la hélice de lo catiónico-hidrofílico de un lado y del otro residuos hidrofóbicos. La adición de grupos fluorescentes en una cabeza de la molécula confiere propiedades de contraste. Una nueva estrategia para permitir la capacidad de admisión celular de CPPs está basada en la asociación de dominios policatiónicos y polianiónicos que están separados por un enlazador. La asociación celular de los residuos policatiónicos (poliarginina) con la membrana cargada de forma negativa es bloqueada efectivamente por la presencia de residuos polianiónicos (poli-ácido glutámico) y el enlace, que confiere la distancia adecuada entre estos dos residuos cargados para maximizar su interacción. Estos péptidos adoptan la estructura [[Tallo-bucle|tallo bucle]], confirmada por la correlación del efecto Overhauser para proximidades protón-protón de los dos restos cargados. En esta etapa sólo el enlace es expuesto a la hidrólisis de las proteasas en aplicaciones ''in vivo.'' La hidrólisis del enlace ocurre y los fragmentos con cargas experimentan una mayor libertado conformacioal.En la ausencia del enlace, el péptido catiónico puede interaccionar de manera eficiente con la célula objetivo y la admisión celular ocurre antes de la proteólisis. Esta estrategia tiene aplicaciones en el marcaje de células tumorales ''in vivo''. Las células tumorales son marcadas en minutos. La degradación del enlace puede ser predicha por la cantidad de D-aminoácidos (isómero natural) incorporado en la cadena peptídica, esto restringe ''in vivo'' la proteólisis del enlace central.<ref>Wright, L. R., Rothbard, J. B. & Wender, P. A. (2003) Curr. Protein Pept. Sci.2003(4), 105–124.</ref><ref>Gammon, S. T., Villalobos, V. M., Prior, J. L., Sharma, V. & Piwnica-Worms, D. (2003) Bioconjugate Chem.2003(14), 368–376.</ref><ref>Polyakov, V., Sharma, V., Dahlheimer, J. L., Pica, C. M., Luker, G. D. & Piwnica-Worms, D. Bioconjugate Chem. 2000(11), 762–771.</ref><ref>Jiang, T., S. Olson, E., S., Nguyen, Q., T., Roy, M., Jennings, P., A., , Tsien, R., Y., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2004(101) 17867-17872.</ref>

==== Agentes de contraste como moléculas de carga ====

===== Puntos cuánticos =====
Los [[punto cuántico|puntos cuánticos]] (QD, por sus siglas en inglés) representan una clase relativamente nueva de sondas fluorescentes que tienen propiedades de óptica superior que los clásicos tintes orgánicos basados en grupos fluorescentes. La principal ventaja de los QD incluyen altos rendimientos cuánticos, espectros de absorción amplio, tamaño-sintonizable de los espectros de emisión, y una buena resistencia a la degradación química y fotoquímica. Pruebas in vivo han demostrado que varios péptidos con carga positiva (basados en residuos de guanadina) son capaces de atravesar la membrana y promover la admisión celular de moléculas adheridas como los puntos cuánticos. Las propiedades de los últimos se pueden modificar de forma sencilla al cambiar el sustrato orgánico enlazado con ellos, ofreciendo una herramienta biológica con versatilidad como marcadores celulares. Investigación está en desarrollo para optimimizar las metodologías de la administración celular de los puntos cuánticos y sus bioconjugados y la caracterización de sus propiedades fotofísicas a largo plazo ''in vivo.''
<ref name=":0">Delehanty, J., B., Medintz, I., L., Pons, T., Brunel, F., M., Dawson P., E., Mattoussi, H., Bioconjugate Chem. 2006, 17, 920-927.</ref>
<ref name=":1">Alivisatos, A. P., Gu, W., and Larabell, C. A., Ann. Rev. Biomed. Eng. 2005(7), 55-76.</ref>
<ref name=":2">Alivisatos, P., Nat. Biotechnol. 2004(22,) 47-52.</ref>
<ref name=":3">Medintz, I. L., Uyeda, Nat. Mater. 4, 435-446.</ref>
<ref name=":4">Parak, W. J., Gerion, D., Pellegrino, T., Zanchet, D., Micheel, C., Williams, S. C., Boudreau, R., Le Gros, M. A., Larabell, C. A., and Alivisatos, A. P., Nanotechnology (2003)14, R15-R27.</ref>
<ref name=":5">Parak, W., Pellegrino, T., and Plank, C., Nanotechnology 2005(16), R9-R25.</ref>

Los puntos cuánticos son nanocristales coloidales, basados en un núcleo de cadmio-selenio (CdSe) cubierto por una capa de zinc-azufre (ZnS). Este sustrato se ha usado de manera extensiva como marcadores celulares ya que el CdSe emite en el dominio visible y es un excelente agente de contraste, mientras que la capa de ZnS protege el núcleo de la oxidación y también extracción del CdSe hacia la solución circundante. Esta estrategia mejora la cesión de foto-luminiscencia. Las propiedades puede ser moduladas por el grosor de la capa protectora de ZnS. La emisión coloidal de QD se puede modular de la UV-Vis hacia la infrarroja al usar diferentes agentes de cubierta como ZnS, CdS, ZnSe, CdTe y PbSe. Las propiedades de los puntos cuánticos puede también ser modulado por un esquema sintético, alta temperatura de las mezclas de solvente/ligando que influencia en las propiedades del nanocristal. Los agentes QD de alta calidad se obtienen a altas temperaturas; sin embargo, debido a su baja solubilidad en agua su uso como marcadores celulares está limitado, Además su funcionalidad con ligandos hidrofílicos es requerida.<ref>Dabbousi, B. O. et al. J. Phys. Chem. B 1997(101), 9463–9475.</ref><ref>Medintz, I., L., Uyeda, H., T., Goldman, E., R., Mattoussi, H., Nature Materials, 2005,(4) 435-446.</ref>

Las ventajas de los QD está representada por su rápida acción; son capaces de marcar un tejido objetivo o célula en segundos. En estudios ''in vivo'' se demostró que los QD son capaces de marcar de manera selectiva células de cáncer y acumularse en sitios tumorales. Las células tumorales marcadas pueden ser seguidas con un microscopio multifotón mientras invaden tejido de pulmón. En ambos estudios la imagen y substracción de auto-fluorescencia permite la visualización multicolor ''in vivo'' de las células y tejidos. Un mayor contratiempo de los QD es su relativamente alta toxicidad. La funcionalización con diferentes sustratos que incrementan la bioafinidad y disminuye la toxicidad están en progreso. Por ejemplo, el sulfuro de la capa del QD es capaz de formar enlaces disulfuro reversibles con una amplia clase de compuestos orgánicos.<ref>Gao, X., Cui, Y., Levenson, R., M., Chung, L., W., K., Nie, S., Nature Biotechnol. 2004(22), 969–976.</ref><ref>Voura, E. B., Jaiswal, J. K., Mattoussi, H. & Simon, S. M. Nature Med. 2004(10), 993–998.</ref>

==== Imagen por resonancia magnética ====

La imagen por resonancia magnética (IRM) es una herramienta poderosa para el diagnóstico de enfermedades como la metástasis en cáncer e inflamación, usando diferentes metales quelatos. Los metales quelatos incrementan la señal de contraste entre los tejidos normales y los enfermos al cambiar los tiempos de relajación nuclear del agua y las moléculas próximas. Los ejemplos típicos de quelatos son las moléculas de poco peso moléculas Gd3+, óxido de hierro superparamagnético (SPIO, por sus siglas en inglés). En la administración ''in vivo'' de estos agentes permite el marcar células tumorales; o células pueden ser marcadas ''in vitro'' con agentes de contraste y después ser inyectadas y monitoreadas ''in vivo'' mediante el uso de las IRM.<ref>Lewis, B. K., Zywicke, H., Miller, B., van Gelderen, P., Moskowitz, B. M., Duncan, I. D., and Frank, J. A., Nat. Biotechnol. 2001(19), 1141–1147.</ref><ref>Pittet, M. J., Swirski, P. K., Reynolds, F., Josephson, L., and Weissleder, R., Nat. Protoc. 2006(1), 73–78.</ref><ref>Foster, P. J., Dunn, E. A., Karl, K. E., Snir, J. A., Nycz, C. M., Harvey, A. J., and Pettis, R. J., Neoplasia 2008(10), 207–216.</ref>

Las nanopartículas de SPIO confieren una alta sensibilidad a la IRM pero tienen baja afinidad por las células; trabajan a altas concentraciones. La funcionalización de estos compuestos usando guanadinas dedriméricas mostró actividades similares a las TAT basadas en CPPs pero con mayor toxicidad. Sustratos nuevos basados en dendrones con grupos periféticos hidroxil o amina presentan menor toxicidad. Las aplicaciones de SPIO incluyen el marcaje celular ''in vivo'', debido a la baja toxicidad, están aprobados para su uso clínico en hígado, vaso e imagen gastrointestinal.<ref>Martin, A., L., Bernas, L., M., Rutt, B., K., Foster, P., J., Gillies, E., R., Bioconjugate Chem. 2008(19), 2375–2384.</ref>

La presencia de residuos octaméricos de argenina permite la transducción de la membrana celular con varias moléculas de carga incluyendo péptidos, DNA, siRNA y agentes de contraste. Sin embargo, la habilidad de cruzar la membrana no es unidireccional; los CPPs basados en argenina son capaces de entrar y salir de la membrana, provocando una concentración general decreciente del agente de contraste y una señal resonancia magnética (RM) decreciente en un tiempo. Esto limita sus aplicaciones ''in vivo''. Para resolver este problema, agentes de contraste con disulfuro, enlaces reversibles entre metales quelato y fracciones de transducción permiten la retención asociada a la célula. Los puentes disulfuros son reducidos por el ambiente celular y los metales quelato se mantienen atrapados en el citoplasma, incrementando el tiempo de retención en la célula objetivo.<ref>Allen, M. J., MacRenaris, K. W., Venkatasubramanian, P. N., and Meade, T. J. (2004) Chem. Biol. 2004(11), 301–307.</ref><ref>Futaki, S., Adv. Drug Delivery Rev. 2005(57) 547–558.</ref><ref>Futaki, S., Suzuki, T., Ohashi, W., Yagami, T., Tanaka, S., Ueda, K., and Sugiura, Y. (2001) J. Biol. Chem. 2001(276), 5836–5840.</ref><ref>Endres, P., J., MacRenaris,K., W., Stefan Vogt, S., Meade, T., J., Bioconjugate Chem. 2008(19), 2049–2059.</ref>
== Referencias ==
{{listaref|2}}

== Enlaces externos ==
* [http://www.rsc.org/Publishing/Journals/cb/Volume/2008/5/crossing.asp Instant insight] hacia los péptidos de penetración celular de la [[Royal Society of Chemistry]] (inglés)
* [http://www.cell-penetrating-peptides.com www.cell-penetrating-peptides.com] Página web dinámica creada por científicos que condensa y organiza los avances más novedosos en administración de fármacos y CPPs (inglés)
* [http://crdd.osdd.net/raghava/cppsite/ CPPsite]: Una página web para mantener CPPs. [http://database.oxfordjournals.org/content/2012/bas015.abstract Database (2012) 2012] (inglés)
* [http://crdd.osdd.net/raghava/cellppd/ CellPPD]: Aproximación para el diseño de CPPs altamente efectivos [http://www.translational-medicine.com/content/11/1/74/abstract Journal of Translational Medicine 2013, 11:74]. (inglés)
* [http://bioware.ucd.ie/~compass/biowareweb/Server_pages/cpppred.php CPPpred]: CPPpred: predicción de CPPs [http://bioinformatics.oxfordjournals.org/content/29/23/3094 Bioinformatics (2013) 29 (23): 3094-3096.]. (inglés)

{{DEFAULTSORT:Cell-Penetrating Peptide}}
{{Control de autoridades}}
[[Categoría:Péptidos]]
[[Categoría:Biología celular]]


text:
# Namdalseid
Namdalseid es un municipio y pueblo de la provincia de Trøndelag, en Noruega. La capital municipal es el propio pueblo de Namdalseid. Otras localidades del término municipal son  Sjøåsen, Statland, Tøttdalen y Sverkmoen.
A 1 de enero de 2015 tiene 1644 habitantes.
Originalmente se llamaba Eið, que en antiguo nórdico significaba "camino entre dos aguas", haciendo referencia a que los vikingos lo usaban como canal para navegar entre el fiordo de Beitstad y el fiordo de Namsen; Namdals es el caso genitivo de Namdalen y se añadió al topónimo a mediados del siglo XVI. El municipio fue creado como formannskapsdistrikt en 1838. Entre 1846 y 1904 estuvo integrado en el municipio de Beitstad. En 1964 se amplió su término con parte del territorio del vecino municipio de Otterøy.
El pueblo se ubica sobre la carretera Fv17, a medio camino entre Namsos y Steinkjer.

wikiname: eswiki

title: Namdalseid

in_language: es

wikitext:
{{Ficha de entidad subnacional
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}}
'''Namdalseid''' es un [[Anexo:Municipios de Noruega|municipio]] y [[Pueblo (población rural)|pueblo]] de la provincia de [[Trøndelag]], en [[Noruega]]. La capital municipal es el propio pueblo de Namdalseid. Otras localidades del término municipal son  [[Sjøåsen]], [[Statland]], [[Tøttdalen]] y [[Sverkmoen]].

A 1 de enero de 2015 tiene 1644 habitantes.<ref>[http://www.ssb.no/befolkning/statistikker/folkendrkv/kvartal/2015-11-13?fane=tabell&sort=nummer&tabell=245914 Folkemengd 1. januar og endringane hittil i år. Heile landet, fylke og kommunar]</ref>

Originalmente se llamaba ''Eið'', que en antiguo nórdico significaba "camino entre dos aguas", haciendo referencia a que los [[vikingos]] lo usaban como canal para navegar entre el [[fiordo de Beitstad]] y el [[fiordo de Namsen]]; ''Namdals'' es el [[caso genitivo]] de [[Namdalen]] y se añadió al topónimo a mediados del {{siglo|XVI||s}}.<ref name="snl">{{Cita web|url=http://snl.no/Namdalseid/kommune_i_Nord-Tr%C3%B8ndelag|título=Namdalseid – kommune i Nord-Trøndelag|autor=Store norske leksikon|enlaceautor=Store norske leksikon|idioma=noruego|fechaacceso=15 de agosto de 2011}}</ref> El municipio fue creado como ''[[formannskapsdistrikt]]'' en 1838. Entre 1846 y 1904 estuvo integrado en el municipio de [[Beitstad]]. En 1964 se amplió su término con parte del territorio del vecino municipio de [[Otterøy]].<ref>{{Cita web|nombre=Dag|apellido=Jukvam|editorial=[[Statistics Norway|Statistisk sentralbyrå]]|título=Historisk oversikt over endringer i kommune- og fylkesinndelingen|año=1999|url=http://www.ssb.no/emner/00/90/rapp_9913/rapp_9913.pdf|idioma=noruego}}</ref>

El pueblo se ubica sobre la carretera Fv17, a medio camino entre [[Namsos]] y [[Steinkjer]].<ref>[https://www.google.es/maps/place/Namdalseid,+Noruega/ Mapa de Namdalseid]</ref>

== Referencias ==
{{listaref}}

== Enlaces externos ==
{{commonscat|Namdalseid}}
{{Relación OSM|407246}}

{{Control de autoridades}}
[[Categoría:Municipios de Trøndelag]]

title: Namdalseid

Capital: Namdalseid

Entidad: Municipio

• País: Noruega

• Fylke: Trøndelag

• Tierra: 769,63 km² (masa terrestre)

• Agua: 31,83 km² (lago) y 3,12 km² (río)

• Densidad: 2,11 hab./km²


text:
# See (serie de televisión)
See es una serie web de drama producida para Apple TV+. Está escrita por Steven Knight y dirigida por Francis Lawrence. Entre los productores ejecutivos se incluye a Knight, Lawrence, Peter Chernin, Jenno Topping y Kristen Campo.
La serie se estrenó el 1 de noviembre de 2019. La segunda temporada de la serie se estrenó el 27 de agosto de 2021.

## Sinopsis
See tiene lugar en "un futuro cuando la especie humana ha perdido el sentido de la vista, y la sociedad ha tenido que encontrar nuevas formas de interactuar, construir, cazar y sobrevivir. La vista se considera un mito. Todo eso se ve desafiado cuando un par de gemelos nacen con la capacidad de ver."

## Reparto

### Principales
- Jason Momoa como Baba Voss, un valiente guerrero y líder de la Tribu Alkenny. Es el esposo de Maghra y hermano mayor de Edo Voss, y padre adoptivo de Kofun y Haniwa, niños nacidos con el sentido ahora dormido de la vista. Él coloca la seguridad de su familia, amigos y tribu como máxima prioridad para protegerlos de los Cazadores de Brujas.
- Sylvia Hoeks como Sibeth Kane, la gobernante del Reino Payan y hermana mayor de Maghra. Ella ejerce su poder sin piedad y asesina a cualquiera que difunda la herejía sobre el sentido de la vista.
- Hera Hilmar como Maghra Kane, quien se unió a la Tribu Alkenny como una extraña, y pronto se casó con Baba Voss. Ella es la hermana menor de Sibeth y la madre de Kofun y Haniwa. Feroz protectora de su familia, Maghra hará todo lo necesario para mantenerlos con vida.
- Christian Camargo como Tamacti Jun, el recaudador de impuestos real y el general cazador de brujas del ejército de Payan. Un soldado brillante y violento, tiene la tarea de encontrar a los que tienen vista, específicamente a los hijos de Jerlamarel.
- Archie Madekwe como Kofun, el hijo de Baba Voss y Maghra, y el hijo biológico de Jerlamarel, que tiene la capacidad de ver. Sereno, cuidadoso e inteligente, se vuelve más cauteloso que su hermana melliza Haniwa.
- Nesta Cooper como Haniwa, la hija de Baba Voss y Maghra, y la hija biológica de Jerlamarel, quien también tiene la habilidad de ver. Orgullosa, decidida y fuerte, se vuelve más rebelde que su hermano mellizo Kofun, y más curiosa sobre sus verdaderos orígenes.
- Yadira Guevara-Prip como Bow Lion, un feroz aliado de Baba Voss y miembro de la Tribu Alkenny. Es la hija de The Dreamer y posee las habilidades de un "Shadow Warrior", con la rara habilidad de moverse sin ser detectada por el sonido o el olfato. (temporada 1; temporada de invitados 2)
- Alfre Woodard como Paris, un sabio miembro mayor de la Tribu Alkenny. Su sabiduría innata guía a Baba Voss, especialmente en tiempos de crisis, y actúa como una madre adoptiva para él. Ella también sirve como el  chamán de la tribu. (temporadas 1-2)
- Eden Epstein como Wren, un lugarteniente inteligente y ambicioso del ejército de Trivantian, que tiene la capacidad de ver y es un confidente cercano de Edo Voss. (temporada 2-presente)
- Olivia Cheng como Charlotte, una feroz guerrera y protectora de Alkenny. No tiene filtro y no se avergüenza de decir lo que tenga en mente. (temporada 2-presente)
- Hoon Lee como Toad, un hábil soldado buscador de brujas. Cree que la vista es maligna, lo cual ha estado arraigado en él desde su infancia (temporada 2).
- Tom Mison como Lord Harlan, el gobernante de la ciudad de Pennsa que habla rápido, inteligente y astuto. Es el hermano mayor de Kerrigan y amigo de la infancia de Maghra. (temporada 2)
- Dave Bautista como Edo Voss, el vengativo hermano menor de Baba Voss y el comandante general del ejército de Trivantian, el reino rival de Payan (temporada 2).

### Recurrentes
- Joshua Henry como Jerlamarel, un hereje y predicador de la vista. Es el padre biológico de Kofun, Haniwa, Boots y muchos otros niños videntes. (temporadas 1-2)

- Tantoo Cardinal como The Dreamer, un miembro mayor de la Tribu Alkenny y la madre de Bow Lion. (temporada 1)
- Mojean Aria como Gether Bax, un miembro indigno de confianza de la Tribu Alkenny y sobrino de Souter Bax. (temporada 1)
- Marilee Talkington como Souter Bax, miembro de la tribu Alkenny y tía de Gether Bax. (temporada 1)
- Luc Roderique como Arca, el intendente de la Tribu Alkenny que es leal a Baba Voss. (temporada 1)
- Bree Klauser como Matal, miembro de la Tribu Alkenny y "Presage", alguien con una capacidad extrasensorial para sentir emociones. (temporada 1)
- Peter James Bryant como Lord Dune, uno de los consejeros de Sibeth Kane y miembro del consejo gobernante de Payan. (temporada 1)
- Hiro Kanagawa como Lord Unoa, el médico real de Payan. (temporada 1)
- Lauren Glazier como Nyrie, la leal dama de honor de Sibeth Kane. (temporada 1)
- Franz Drameh como Boots, un misterioso exmiembro de una tribu carroñera. También es hijo de Jerlamarel y tiene la capacidad de ver. (temporada 1; temporada de invitados 2)
- Timothy Webber como Cutter, un dueño de esclavos que controla una operación de fabricación de seda que abastece a los nobles de Payan. (temporada 1)
- Jessica Harper como Cora, una esclava que trabajaba en las granjas de seda de Cutter, hasta que más tarde gana su libertad. (temporada 1; temporada de invitados 2)
- Dayo Okeniyi como Oloman, el mayor de los hijos videntes de Jerlamarel y su mano derecha, quien también es un ingeniero competente. (temporada 2; temporada de invitados 1)
- Adrian Groulx como Rockwell, un niño pequeño de Jerlamerel que fue regalado a Edo Voss para que pueda aprovechar la vista en combate. (temporada 2)
- Alex Breaux como Dax, un cazador de brujas al mando de Toad. (temporada 2)
- Adam Morse como Frye, un buscador de brujas que sirve a las órdenes de Toad. (temporada 2)
- Luke Humphrey como Kerrigan, hermano menor de Lord Harlan y consejero cercano. (temporada 2)
- Martin Roach como el Capitán Gosset, el comandante de las fuerzas militares en Pennsa. (temporada 2)
- Nina Kiri como Harmony, una sirvienta en Pennsa que atiende tanto a Sibeth como a Maghra Kane. (temporada 2)

## Producción

### Desarrollo
El 10 de enero de 2018, se anunció que Apple había dado a la producción un pedido en serie para una sola temporada. La serie debía ser escrita por Steven Knight y dirigida por Francis Lawrence, quienes también debían ser productores ejecutivos junto a Peter Chernin, Jenno Topping y Kristen Campo. Entre las compañías de producción involucradas con la serie están consistidas por Chernin Entertainment y Endeavor Content.

### Reparto
En julio de 2018, se anunció que Jason Momoa y Alfre Woodard habían sido elegidos en papeles regulares de la serie. En agosto de 2018, se anunció que Yadira Guevara-Prip, Nesta Cooper, Sylvia Hoeks y Archie Madekwe se habían unido al elenco principal. El 18 de octubre de 2018, se informó que Christian Camargo y Hera Hilmar habían sido elegidos en papeles regulares de la serie.

### Rodaje
El rodaje de la primera temporada comenzó el 17 de septiembre de 2018 en Vancouver, Columbia Británica, Canadá y se espera que dure hasta el 8 de febrero de 2019. En octubre de 2018, se informó que la filmación se llevaría a cabo en las áreas de Parque Provincial de Comox y Strathcona de Isla de Vancouver, Columbia Británica.
Según Wall Street Journal, Apple está gastando casi 15 millones de dólares por episodio, comparándola con la última temporada de Game of Thrones.

title: See (serie de televisión)

wikitext:
{{Ficha de programa de televisión
| tipo = 4
| título = See
| género = [[Drama]]
| creador = Steven Knight
| protagonistas = {{Lista simple|
*[[Jason Momoa]]
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| distribuidor = [[Apple]]
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}}

'''''See''''' es una [[serie web]] de drama producida para [[Apple TV+]]. Está escrita por Steven Knight y dirigida por Francis Lawrence. Entre los productores ejecutivos se incluye a Knight, Lawrence, Peter Chernin, Jenno Topping y Kristen Campo.

La serie se estrenó el 1 de noviembre de 2019.<ref>{{Cita web|url=https://www.cnet.com/es/noticias/see-jason-momoa-serie-de-apple-tv-plus-trailer-y-fecha-de-estreno/|título=See: La nueva serie de Apple TV Plus ya tiene tráiler y fecha de estreno|fechaacceso=22 de septiembre de 2019|apellido=Jiménez|nombre=Gonzalo|sitioweb=CNET en Español|idioma=es}}</ref> La segunda temporada de la serie se estrenó el 27 de agosto de 2021.<ref>{{cite web|url=https://nexttvseries.com/see-temporada-2-reparto-episodios/|title=See Temporada 2 en Apple TV Plus|work=nexttvseries.com|date=24 de agosto de 2021|accessdate=24 de agosto de 2021}}</ref>

== Sinopsis ==
''See'' tiene lugar en "un futuro cuando la especie humana ha perdido el sentido de la vista, y la sociedad ha tenido que encontrar nuevas formas de interactuar, construir, cazar y sobrevivir. La vista se considera un mito. Todo eso se ve desafiado cuando un par de gemelos nacen con la capacidad de ver."<ref>{{Cita web|url=https://deadline.com/2018/07/jason-momoa-star-see-apple-series-steven-knight-francis-lawrence-1202423719/|título=Jason Momoa To Star In Apple Series ‘See’ From Steven Knight & Francis Lawrence|fechaacceso=22 de septiembre de 2019|apellido=Andreeva|nombre=Nellie|fecha=10 de julio de 2018|sitioweb=Deadline|idioma=en}}</ref>

== Reparto ==

=== Principales ===
* [[Jason Momoa]] como Baba Voss, un valiente guerrero y líder de la Tribu Alkenny. Es el esposo de Maghra y hermano mayor de Edo Voss, y padre adoptivo de Kofun y Haniwa, niños nacidos con el sentido ahora dormido de la [[vista]]. Él coloca la seguridad de su familia, amigos y tribu como máxima prioridad para protegerlos de los Cazadores de Brujas.
* [[Sylvia Hoeks]] como Sibeth Kane, la gobernante del Reino Payan y hermana mayor de Maghra. Ella ejerce su poder sin piedad y asesina a cualquiera que difunda la herejía sobre el sentido de la vista.
* [[Hera Hilmar]] como Maghra Kane, quien se unió a la Tribu Alkenny como una extraña, y pronto se casó con Baba Voss. Ella es la hermana menor de Sibeth y la madre de Kofun y Haniwa. Feroz protectora de su familia, Maghra hará todo lo necesario para mantenerlos con vida.
* [[Christian Camargo]] como Tamacti Jun, el recaudador de impuestos real y el general cazador de brujas del ejército de Payan. Un soldado brillante y violento, tiene la tarea de encontrar a los que tienen vista, específicamente a los hijos de Jerlamarel.
* [[Archie Madekwe]] como Kofun, el hijo de Baba Voss y Maghra, y el hijo biológico de Jerlamarel, que tiene la capacidad de ver. Sereno, cuidadoso e inteligente, se vuelve más cauteloso que su hermana melliza Haniwa.
* [[Nesta Cooper]] como Haniwa, la hija de Baba Voss y Maghra, y la hija biológica de Jerlamarel, quien también tiene la habilidad de ver. Orgullosa, decidida y fuerte, se vuelve más rebelde que su hermano mellizo Kofun, y más curiosa sobre sus verdaderos orígenes.
* [[Yadira Guevara-Prip]] como Bow Lion, un feroz aliado de Baba Voss y miembro de la Tribu Alkenny. Es la hija de The Dreamer y posee las habilidades de un "Shadow Warrior", con la rara habilidad de moverse sin ser detectada por el sonido o el olfato. (temporada 1; temporada de invitados 2)
* [[Alfre Woodard]] como Paris, un sabio miembro mayor de la Tribu Alkenny. Su sabiduría innata guía a Baba Voss, especialmente en tiempos de crisis, y actúa como una madre adoptiva para él. Ella también sirve como el [[chamanismo | chamán]] de la tribu. (temporadas 1-2)
* Eden Epstein como Wren, un lugarteniente inteligente y ambicioso del ejército de Trivantian, que tiene la capacidad de ver y es un confidente cercano de Edo Voss. (temporada 2-presente)
* [[Olivia Cheng (actriz canadiense) | Olivia Cheng]] como Charlotte, una feroz guerrera y protectora de Alkenny. No tiene filtro y no se avergüenza de decir lo que tenga en mente. (temporada 2-presente)
* [[Hoon Lee]] como Toad, un hábil soldado buscador de brujas. Cree que la vista es maligna, lo cual ha estado arraigado en él desde su infancia (temporada 2).
* [[Tom Mison]] como Lord Harlan, el gobernante de la ciudad de Pennsa que habla rápido, inteligente y astuto. Es el hermano mayor de Kerrigan y amigo de la infancia de Maghra. (temporada 2)
* [[Dave Bautista]] como Edo Voss, el vengativo hermano menor de Baba Voss y el comandante general del ejército de Trivantian, el reino rival de Payan (temporada 2).

=== Recurrentes ===

* [[Joshua Henry]] como Jerlamarel, un hereje y predicador de la vista. Es el padre biológico de Kofun, Haniwa, Boots y muchos otros niños videntes. (temporadas 1-2)

* [[Tantoo Cardinal]] como The Dreamer, un miembro mayor de la Tribu Alkenny y la madre de Bow Lion. (temporada 1)
* [[Mojean Aria]] como Gether Bax, un miembro indigno de confianza de la Tribu Alkenny y sobrino de Souter Bax. (temporada 1)
* Marilee Talkington como Souter Bax, miembro de la tribu Alkenny y tía de Gether Bax. (temporada 1)
* Luc Roderique como Arca, el intendente de la Tribu Alkenny que es leal a Baba Voss. (temporada 1)
* Bree Klauser como Matal, miembro de la Tribu Alkenny y "Presage", alguien con una capacidad extrasensorial para sentir emociones. (temporada 1)
* [[Peter James Bryant]] como Lord Dune, uno de los consejeros de Sibeth Kane y miembro del consejo gobernante de Payan. (temporada 1)
* [[Hiro Kanagawa]] como Lord Unoa, el médico real de Payan. (temporada 1)
* [[Lauren Glazier]] como Nyrie, la leal [[dama de honor]] de Sibeth Kane. (temporada 1)
* [[Franz Drameh]] como Boots, un misterioso exmiembro de una tribu carroñera. También es hijo de Jerlamarel y tiene la capacidad de ver. (temporada 1; temporada de invitados 2)
* [[Timothy Webber]] como Cutter, un dueño de esclavos que controla una operación de fabricación de seda que abastece a los nobles de Payan. (temporada 1)
* [[Jessica Harper]] como Cora, una esclava que trabajaba en las granjas de seda de Cutter, hasta que más tarde gana su libertad. (temporada 1; temporada de invitados 2)
* [[Dayo Okeniyi]] como Oloman, el mayor de los hijos videntes de Jerlamarel y su mano derecha, quien también es un ingeniero competente. (temporada 2; temporada de invitados 1)
* Adrian Groulx como Rockwell, un niño pequeño de Jerlamerel que fue regalado a Edo Voss para que pueda aprovechar la vista en combate. (temporada 2)
* Alex Breaux como Dax, un cazador de brujas al mando de Toad. (temporada 2)
* Adam Morse como Frye, un buscador de brujas que sirve a las órdenes de Toad. (temporada 2)
* Luke Humphrey como Kerrigan, hermano menor de Lord Harlan y consejero cercano. (temporada 2)
* [[Martin Roach]] como el Capitán Gosset, el comandante de las fuerzas militares en Pennsa. (temporada 2)
* Nina Kiri como Harmony, una sirvienta en Pennsa que atiende tanto a Sibeth como a Maghra Kane. (temporada 2)

== Producción ==

=== Desarrollo ===

El 10 de enero de 2018, se anunció que Apple había dado a la producción un pedido en serie para una sola temporada. La serie debía ser escrita por Steven Knight y dirigida por Francis Lawrence, quienes también debían ser productores ejecutivos junto a Peter Chernin, Jenno Topping y Kristen Campo. Entre las compañías de producción involucradas con la serie están consistidas por Chernin Entertainment y Endeavor Content.

=== Reparto ===
En julio de 2018, se anunció que Jason Momoa y Alfre Woodard habían sido elegidos en papeles regulares de la serie. En agosto de 2018, se anunció que Yadira Guevara-Prip, Nesta Cooper, Sylvia Hoeks y Archie Madekwe se habían unido al elenco principal. El 18 de octubre de 2018, se informó que Christian Camargo y Hera Hilmar habían sido elegidos en papeles regulares de la serie.

=== Rodaje ===

El rodaje de la primera temporada comenzó el 17 de septiembre de 2018 en Vancouver, Columbia Británica, Canadá y se espera que dure hasta el 8 de febrero de 2019. En octubre de 2018, se informó que la filmación se llevaría a cabo en las áreas de Parque Provincial de Comox y Strathcona de Isla de Vancouver, Columbia Británica.

Según Wall Street Journal, Apple está gastando casi 15 millones de dólares por episodio, comparándola con la última temporada de [[Game of Thrones]].<ref>{{Cita web|url=https://elpais.com/cultura/2019/10/25/television/1571990957_342832.html|título=La imparable inflación de las series|fechaacceso=7 de diciembre de 2019|autor=Álvaro P. Ruiz de Elvira|fecha=27 de octubre de 2019|editor=El País}}</ref><ref>{{Cita web|url=https://www.lavanguardia.com/series/20191101/471304124147/apple-tv-serie-see-drama-protagonista-jason-momoa.html|título=‘See’, el carísimo drama épico de Apple TV+ que recibe los palos de la crítica|fechaacceso=7 de diciembre de 2019|fecha=1 de noviembre de 2019|editor=La Vanguardia}}</ref><ref>{{Cita web|url=https://www.xataka.com/cine-y-tv/see-para-toda-humanidad-apple-tv-apuesta-ciencia-ficcion-visualmente-espectacular|título=‘See’ y ‘Para toda la humanidad’: Apple TV+ apuesta por una ciencia-ficción visualmente espectacular|autor=John Tones|fecha=7 de noviembre de 2019}}</ref>

== Referencias ==
{{Listaref}}

== Enlaces externos ==
*{{imdb título|7949218}}

{{Control de autoridades}}
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[[Categoría:Series de televisión de Estados Unidos]]
[[Categoría:Series de televisión de drama]]
[[Categoría:Series de televisión de drama de Estados Unidos]]
[[Categoría:Series de televisión en inglés]]
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[[Categoría:Producciones de televisión suspendidas debido a la pandemia de COVID-19]]
[[Categoría:Series de televisión ambientadas en el futuro]]

title: See

Género: Drama

Creado por: Steven Knight

Protagonistas: - Jason Momoa - Alfre Woodard - Yadira Guevara-Prip - Nesta Cooper - Sylvia Hoeks - Archie Madekwe - Christian Camargo - Hera Hilmar - Mojean Aria

Compositor(es): Bear McCreary

País de origen: Estados Unidos

Idioma(s) original(es): inglés

title: Producción

Productor(es) ejecutivo(s): - Francis Lawrence - Steven Knight - Peter Chernin - Jenno Topping - Kristen Campo

Empresa(s) productora(s): Chernon Entertainment · Endeavor Content

Distribuidor: Apple

title: Lanzamiento

Medio de difusión: Apple TV+

Calificación por edades: Bandera de Estados Unidos · Bandera de España

Primera emisión: 1 de noviembre de 2019

Última emisión: 14 de octubre de 2022

title: Enlaces externos

Enlaces externos:
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